Maestría en Medicina Tropical
https://hdl.handle.net/10946/214
2024-03-28T10:01:12ZUtilidad de CD1a como inmunomarcador en la detección de formas crónicas de leishmaniasis tegumentaria
https://hdl.handle.net/10946/8175
Utilidad de CD1a como inmunomarcador en la detección de formas crónicas de leishmaniasis tegumentaria
Aristizábal Parra, Lucero Katherine
Introducción: La leishmaniasis es una enfermedad crónica vectorial, causada por parásitos del género Leishmania. Esta enfermedad presenta un espectro clínico variable, siendo la leishmaniasis tegumentaria la más prevalente. Una de las limitaciones de esta enfermedad, es la complejidad en la visualización de este parásito utilizando los métodos diagnósticos convencionales, principalmente en sus formas oligoparasitarias. Por lo tanto, una técnica que ha demostrado ser útil en el viejo mundo para la visualización de este parásito, es la inmunomarcación con CD1a, sin embargo, en el nuevo mundo concretamente en Colombia, no hay estudios que demuestren la utilidad de este inmunomarcador. Por esta razón, el objetivo de esta investigación, es determinar la utilidad de CD1a como inmunomarcador en la detección de formas crónicas de leishmaniasis tegumentaria.
Metodología: Este estudio es prueba de una prueba, en donde se incluyeron 48 muestras incluidas en parafina, las cuales se dividieron en tres grupos: Muestras con moderada- alta carga parasitaria (n:15), baja carga (n:15), inflamación granulomatosa crónica (n: 13). Además, se incluyó un grupo de cinco muestras con diagnóstico de Histoplasmosis cutánea, las cuales se tiñeron con el inmunomarcador CD1a Clon EP3622.
Resultados: Se evidenció una inmunomarcación de amastigotes con CD1a en el 46,51% de las muestras evaluadas. No se evidenciaron diferencias estadísticamente significativas (P >0,05) entre la carga parasitaria obtenida por Hematoxilina-eosina y inmunohistoquímica de CD1a con respecto al número de copias de Leishmania spp. evidenciadas por RT-qPCR (gen 18s rDNA). Se evidenció una menor sensibilidad diagnóstica de CD1a con respecto a Hematoxilina-eosina y la prueba molecular.
Conclusión: La inmunohistoquímica para CD1a, podría ser un apoyo diagnóstico en la detección de formas crónicas de leishmaniasis tegumentaria.
2023-11-30T00:00:00ZIdentificación de biomarcadores para la enfermedad de Chagas en fase crónica utilizando la estrategia de BIO-SELEX
https://hdl.handle.net/10946/8157
Identificación de biomarcadores para la enfermedad de Chagas en fase crónica utilizando la estrategia de BIO-SELEX
Morales Velásquez, Mateo; Ospina Villa, Juan David; Osorio Pulgarín, Marìa Isabel; Barón Vera, Juan Pablo; Sánchez Jiménez, Miryan Margot
Introducción: La enfermedad de Chagas, causada por el parásito Trypanosoma cruzi, es endémica en América Latina y se presenta en dos fases: aguda y crónica. La fase crónica es de complejo diagnóstico, por lo que se busca encontrar nuevos biomarcadores que mejoren su detección. Los aptámeros, son moléculas de ADN o ARN con alta afinidad y especificidad hacia moléculas objetivo. Gracias a su
versatilidad y capacidad de reconocimiento, se perfilan como una prometedora opción para la búsqueda de nuevos biomarcadores y potencial uso en el diagnóstico de la enfermedad de Chagas.
Objetivo: Identificar biomarcadores potencialmente útiles para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas en fase crónica utilizando la estrategia Bio-SELEX.
Metodología: Este estudio fue observacional que involucró 4 grupos, cada uno con 18 muestras de suero. Se extrajeron proteínas de estas muestras para llevar a cabo una estrategia modificada de SELEX, denominada Bio-SELEX. Luego, se aislaron e identificaron las proteínas reconocidas por medio de Pull-Down y LC-MS/MS. Finalmente se hicieron experimentos de Docking molecular para conocer la interacción aptámero-proteína.
Resultados: Tras realizar el proceso de Bio-SELEX, se obtuvieron por NGS 204,132 secuencias de potenciales aptámeros, de las cuales se seleccionaron las cinco más representativas, denominando a la primera como CH1. Se aislaron bandas en dos grupos de muestras (extractos de proteínas y en sueros totales de pacientes con EC) por Pull-Down y entre las proteínas identificadas por LC-MS/MS, se destacó la subunidad alfa de ATPasa de T. cruzi como potencial biomarcador. Se realizó Docking molecular entre el aptámero CH1 y la proteína, identificando aminoácidos y nucleótidos críticos involucrados en la interacción.
Discusión: La subunidad alfa de ATPasa fue la única detectada en ambos grupos (extractos de proteínas y sueros individuales). Las ATPasas son esenciales para la supervivencia y virulencia del parásito, lo que las convierte en posibles objetivos diagnósticos y terapéuticos. El enfoque Bio-SELEX permitió la identificación directa de la subunidad alfa de ATPasa de T. cruzi pero se necesita más investigación para su completa caracterización y comprender su función en el metabolismo celular del parásito.
Conclusión: La identificación directa de la subunidad alfa de la ATPasa mediante el aptámero CH1 por Bio-SELEX abre potenciales usos diagnósticos, pero se necesita más investigación para su completa caracterización y el diseño de posibles herramientas diagnósticas.
2023-11-28T00:00:00ZDesarrollo de un prototipo para el diagnóstico serológico de Rickettsia spp. utilizando la proteina recombinante Sca1
https://hdl.handle.net/10946/7379
Desarrollo de un prototipo para el diagnóstico serológico de Rickettsia spp. utilizando la proteina recombinante Sca1
Cano Moná, Maira Alejandra; Torres Lindarte, Giovanny; Ospina Villa, Juan David; Sánchez Jiménez, Miryan Margot
Introducción: La rickettsiosis es una enfermedad febril de distribución
geográfica mundial. La prueba gold standard para el diagnóstico serológico es la
inmunofluorescencia indirecta (IFI), la cual tiene una sensibilidad (entre el 82% y
97.5%) y especificidad (91,7% y 100%) altas. Sin embargo, esta técnica requiere
de una infraestructura tecnológica costosa y de personal profesional entrenado
en el montaje y lectura de estas pruebas. La producción de proteínas
recombinantes de Rickettsia spp. que tengan potencial para ser usadas como
blancos en el desarrollo de pruebas diagnósticas serológicas de fácil
implementación en laboratorios de distintos niveles de complejidad,
incrementará la capacidad y oportunidad diagnóstica de la rickettsiosis en
nuestro medio, un factor fundamental para reducir la morbilidad y mortalidad. Por
lo tanto, este estudio tuvo como objetivo, desarrollar un prototipo para el
diagnóstico serológico de Rickettsia spp. utilizando proteínas recombinantes
Métodos: Se seleccionaron proteínas de Rickettsia con potencial inmunogénico.
Las secuencias de interés fueron clonadas. Se purificaron las proteínas por
cromatografía líquida y su pureza fue verificada mediante electroforesis en gel
de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio (SDS PAGE) al 20%. Se realizó
Inmunoblot de 100 muestras de 50 pacientes sin diagnóstico de rickettsiosis,
cada uno con sueros tomados en dos momentos: el primero entre 0 y 7 días de
evolución de haber iniciado los síntomas; el segundo, pasados los 14 días del
inicio de los síntomas. Los sueros fueron confirmados con una IFI desarrollada
por el Instituto de Investigaciones Biológicas del Trópico (IIBT) de la Universidad
de Córdoba, utilizando placas sensibilizadas con antígenos de Rickettsia parkeri,
y se detectaron anticuerpos tipo IgG. Se comparó el Inmunoblot desarrollado
frente a la IFI del IIBT para establecer valores de sensibilidad, especificidad, valor
predictivo positivo (VPP), valor predictivo negativo (VPN) e índice Kappa.
Resultados: Se produjo la proteína recombinante Sca1, la cual fue probada en
los ensayos de Inmunoblot para detectar IgG. El índice Kappa obtenido de la
concordancia entre los tres observadores fue de 0,464 (IC: 0,327-0,602,
p<0,0001) con un grado de acuerdo moderado. El Inmunoblot desarrollado frente
a la IFI, obtuvo una sensibilidad del 80% con una especificidad del 57,78%, un
VPP de 17,39%, VPN de 96,30% y una concordancia de 0,1453.
Conclusión: Se evaluó una prueba serológica de novo para el diagnóstico de
Rickettsia spp., utilizando la proteína recombinante Sca1 producida en el ICMT
a partir de un aislamiento colombiano, la cual mostró una sensibilidad del 80% y
una especificidad del 57,78%. El Inmunoblot en desarrollo podría ampliar la
capacidad y oportunidad diagnóstica de esta infección en nuestro medio.
2023-04-03T00:00:00ZFactores asociados a las diferentes formas clínicas del dengue en los pacientes de los municipios de Turbo y Apartadó, Antioquia. 2020-2022
https://hdl.handle.net/10946/7378
Factores asociados a las diferentes formas clínicas del dengue en los pacientes de los municipios de Turbo y Apartadó, Antioquia. 2020-2022
Ortega Diaz, Yuris Esther; Arboleda Naranjo, Margarita; Ríos Tapias, Paola Astrid; Rivera Pedroza, Luis Alberto; Marín Velásquez, Katherine; Restrepo Jaramillo, Bertha Nelly
Introducción: el dengue es una enfermedad viral causada por el virus del Dengue y
transmitida principalmente por los mosquitos hembra de Aedes aegypti, esta
enfermedad sigue generando un alto impacto en la salud pública de Colombia a pesar
de los esfuerzos de diversas entidades. La zona de Urabá es la que más casos aporta al
departamento de Antioquia, por lo que es importante determinar los factores
asociados al dengue con signos de alarma y grave en los municipios de Turbo y
Apartadó, 2020-2022.
Métodos: se realizó un estudio observacional, prospectivo, de seguimiento a una
cohorte. Se captaron 192 pacientes con dengue confirmados mediante métodos
directos (ELISA NS1- RT-PCR) e indirectos (ELISA IgM e IgG), en los municipios de Turbo
y Apartadó, Antioquia, entre 2020 y 2022. Se realizó análisis descriptivo, bivariado y
multivariado, se calcularon RR crudos y ajustados, y se trabajó con una confianza del
95%.
Resultados: se captaron 192 pacientes, de los cuales el 89,1% cursó con infección
secundaria, el 61,5% cursó con dengue con signos de alarma/grave, de estos el 5,1%
evolucionaron a dengue grave; prevaleció el sexo masculino con el 56,3% de los casos
y el 83,8% de los pacientes tenían menos de 18 años. Se identificaron los serotipos
DENV-1, 2 y 4, siendo el DENV-1 el que mayor frecuencia de infección registró. El
80,2% de los pacientes requirió consultar por la enfermedad, de los cuales el 70,8%
requirió hospitalización o ingresó a UCI. Presentar síntomas gastrointestinales
(OR=14,75; p=<0,001) y hemorrágicos (OR=14,63; p=<0,001) aumentaron la
probabilidad de desarrollar formas severas de dengue, al igual que la
hemoconcentración (OR=14,990; p=<0,001), leucopenia (OR=3,02; p=<0,001) y
trombocitopenia (OR=10,54; p=<0,001). De acuerdo con el análisis multivariado, la
presencia de manifestaciones hemorrágicas, la hemoconcentración y la
trombocitopenia, persistieron con significancia en cuanto al riesgo de desarrollo de
dengue con signos de alarma/grave en la población evaluada.
Conclusión: Presentar manifestaciones hemorrágicas, hemoconcentración y
trombocitopenia se comportan como los factores que mejor explican el desarrollo de
dengue con signos de alarma y/o grave por lo que se recalca la importancia de un buen
interrogatorio médico, examen físico y exámenes de laboratorio complementarios
para el diagnóstico oportuno e identificación de signos y síntomas de alarma
tempranos que permita al personal médico manejar adecuadamente al paciente con
dengue.
2023-03-28T00:00:00Z