Evaluación y criopreservación de gametos de Zarigüeyas Didelphis marsupialis, como modelo de conservación de material genético en fauna silvestre

Abstract

Didelphis marsupialis es uno de los principales marsupiales del sur de América. Esta especie se ha visto afectada por el desconocimiento del hombre en el papel que cumple la zarigüeya en el ecosistema, por la deforestación y por la expansión vial. Por este motivo se requiere de la utilización de técnicas para la preservación de la especie, aunque sea una tarea difícil por los obstáculos que se presentan en el proceso, como lo son la logística para la obtención del material biológico y los desafíos asociados con la criopreservación del germoplasma. El objetivo de este proyecto fue evaluar y criopreservar gametos de Zarigüeyas Didelphis marsupialis, como modelo de conservación de material genético en especies de fauna silvestre. Para ello, se colectó el material reproductivo de 18 zarigüeyas,7 machos y 11 hembras ya fallecidas. En las hembras se obtuvieron los ovocitos mediante punción folicular para su vitrificación, además se utilizó un medio de desvitrificación, suplementado con sucrosa. Posvitrificacion se evaluó la morfología de los ovocitos mediante estereomicroscopía, y la viabilidad y la actividad mitocondrial de los ovocitos mediante microscopía de fluorescencia. En el caso de los espermatozoides se obtuvieron a partir de recuperación epididimaria, mediante la técnica de flujo retrogrado e inyección de medio. Previo a la congelación, se evaluó la concentración, movilidad y cinética espermática, mediante un sistema computarizado de análisis de semen; la morfología, mediante la tinción eosina-negrosina, y la vitalidad e integridad acrosómica, mediante microscopía de fluorescencia. La suspensión de espermatozoides recuperada se separó en dos alícuotas que fueron suplementadas con 10% de glicerol y con 10% de DMSO y un medio diluyente a base de Tris hasta alcanzar una concentración de 2 x 106 de espermatozoides por pajilla de 0,25 mL. El semen se sometió a refrigeración durante 30 min a 5 ºC y luego a vapores de nitrógeno líquido. Posdescongelación fueron evaluados los parámetros de calidad seminal mencionados para el semen fresco. Para el análisis estadístico de los datos se realizó una prueba ANOVA simple con un test post hoc de Tukey con una confianza del 95%. Para los ovocitos luego de la vitrificación, se encontró una vitalidad del 50%, una actividad mitocondrial del 66.66%, un citoplasma regular del 44.44% y una zona pelúcida intacta del 50%. En el semen fresco se encontró una vitalidad del 62.45%, una morfología anormal del 64.91% y una movilidad total del 14.61%. Posdecongelación se encontró una vitalidad del 22.47%, morfología anormal de 41.73%, acrosoma intacto de 30.74% y movilidad total del 6.33%. Se concluye que las técnicas y soluciones utilizadas en la criopreservación de gametos de hembras Didelphis marsupialis fueron adecuadas para obtener ovocitos viables luego de la vitrificación. Para la criopreservacción de espermatozoides de Didelphis marsupialis, son necesarios más estudios con el fin de mejorar la calidad de estas células posdescongelación, encaminados al fortalecimiento de la preservación del material genético y por lo tanto de la especie.