Estandarización de una técnica basada en PCR y RFLP para la detección del polimorfismo +3954 en el gen il-1b

Abstract

Antecedentes: Uno de los polimorfismos más frecuentemente asociados con la severidad de la enfermedad periodontal es el de la IL-1β en la posición +3954. Su prevalencia, varía entre diferentes poblaciones y su impacto en cada una está por determinar. Objetivo: Estandarizar una técnica basada en PCR (Polimerase Chain Reaction) y RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism), para detección del polimorfismo en posición +3954 en el gen para la IL-1β. Materiales y métodos: Se recolectaron muestras de ADN a partir de enjuagues e hisopados bucales de 116 pacientes periodontalmente sanos y enfermos. Con PCR se amplificó un fragmento de 249pb para el gen que codifica para la IL-1β; y se realizó análisis de restricción (RFLP) para detectar la presencia del polimorfismo por medio de la enzima TaqI. Resultados y conclusiones: De 116 muestras tomadas, se obtuvo ADN íntegro, en concentraciones suficientes en 52, evidenciando que el método de extracción elegido, afecta la integridad del ADN. El ADN, fue sometido a reacción de amplificación para obtener el fragmento de 249pb, en todas se obtuvo el producto de amplificación esperado. En la digestión de los productos de amplificación, empleando la enzima TaqI; 34 individuos (65%) presentaron un genotipo negativo; 14 (27%), genotipo positivo- 11 (21%) fueron heterocigotos y 3 (6%) fueron homocigotos-; a 4 (8%) no se les pudo realizar el ensayo de restricción. Este es capaz de detectar individuos homocigotos y heterocigotos para ambos alelos. La técnica basada en PCR/RFLP puede emplearse para evaluar asociación del genotipo positivo para el polimorfismo +3964 en el gen IL- 1B y la severidad de la enfermedad periodontal. Es necesario terminar de estandarizar la extracción de ADN.