Efecto de la atresia folicular temprana sobre la competencia de los oocitos bovinos y la cantidad de embriones producidos in vitro (Resultados Preliminares).
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Date
2011
Authors
Urrego Álvarez, Rodrigo
Baena Valencia, María Camila
Borrero Ángel, Laura
Villada Sierra, Clara María
Hoyos Solís, Verónica
Saldarriaga Valencia, Luisa Fernanda
Muñoz Sánchez, Laura
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Univesidad CES
Abstract
Este estudio pretende evaluar el efecto de la atresia folicular temprana sobre la
tasa de blastocistos producidos in vitro y la expresión de los genes OCT-4 y
MATER en el oocito y de FST en células del cúmulo. Los ovarios son aspirados
a las 0 h y a las 4 h después del faenado, las células del cúmulo son separadas
en medio TL-Hepes con 2.5% de tripsina precalentada a 39 ° C y 5 min de
vortex. Se ha determinado que un total de 80 oocitos son suficientes para
obtener una adecuada cantidad de RNA (1.000- 3.000 ng/μl) extraído por el
método Trizol®. El RNA total es pasado a cDNA y la estandarización de la
qPCR se realizó con las siguientes secuencias de primers: OCT-4
(NM_174580.2) F 5´AGTGAGAGGCAACCTGAAGA3´ R 5´ ACACTCGGACCA
CGTCTTTC3´, MATER (NM_001007814.2) F 5´GAAGTGTGGCTGCAGTTGA
A3´ y R 5´ATGCCTCAGCAAATTCATCC 3´, FST (NM_175801.2) F
5´AAAACCTACCGCAACGAATG3´ y R 5´GAGCTGCCTGGACAGAAAAC3´,
gen normalizador GAPDH F 5´TGCTGGTGCTGAGTATGTGGT3´ y R
5´AGTCTTCTGGGTGGCAGTGAT3´. La cuantificación se está realizando con
el kit QuantiTect® SYBR® Green PCR y las condiciones de la qPCR son 95 ° C
15 min para una desnaturalización inicial y 40 ciclos de 95 ° C por 15 s, 60 °C
por 20 s, 72° C por 20 s y una extensión final de 72 ° C por 5 min. Se realizarán
tres repeticiones por cada grupo para analizar la expresión génica y las tasas
de desarrollo embrionario. Los resultados se analizarán por ANOVA utilizando
SAS 9.1.3 y la expresión génica relativa se calculará usando el software REST.
Description
Keywords
Fertilización in vitro, Ganado bovino, Reproducción in vitro, Fuentes de energía, Medicina veterinaria y zootecnia, Producción bovina