Evaluación de la sobrevivencia de embriones bovinos in vitro criopreservados mediante dos técnicas de preservación.

Abstract

El objetivo principal de este trabajo es la comparación entre dos técnicas de vitrificación de embriones bovinos in vitro, evaluando la viabilidad y supervivencia, para lo cual se conformaran dos grupos, cada uno con 20 blastocistos, con una calidad morfológica de excelente a buena de acuerdo a la clasificación IETS. El primer grupo será criopreservado por el método de vitrificación convencional utilizando una solución final, compuesta por: 20 % de glicerol, 20 % de etilenglicol, 0,3 M de sacarosa, 0,3 M de xilosa y 3 % de polietilenglicol, en la cual permanecerán menos de 1 minuto y posteriormente serán empacados en pajillas de 0.25 ml. En el segundo grupo, serán criopreservados por el método de vitrificación en Cryoloop; en una solución final compuesta por: un medio base, TCM 199 con 20 % de SFB, 35 % de etilenglicol, 5 % (p/v) de polivinilpirrolidona, sacarosa 0,5M y sulfato de gentamicina (50 μg/ml), en la cual los embriones se mantendrán entre 25 a 30 segundos a una temperatura de 38 ºC sobre una platina térmica, para después ser criopreservados y almacenados en los Cryoloops. Para la desvitrificación de los embriones del grupo uno, la pajilla donde está el embrión será expuesta al aire por 5 segundos, luego se llevarán al baño María a 20 ºC durante 15 segundos; y para la desvitrificación de los embriones del grupo dos, se colocarán las microgotas en una placa de Petri durante 1 minuto, y posteriormente se transferirán a otra placa por 5 minutos. En los dos procesos se realizará la búsqueda y evaluación del embrión bajo microscopio estereoscópico.