Abstract

Introducción: el material particulado (MP) en sus diferentes tamaños, ha sido objeto de estudio por sus implicaciones en la salud, en especial, el MP 2.5 μm, ya que penetra al torrente sanguíneo y puede llegar a cualquier órgano del cuerpo generando incluso genotoxicidad. Objetivos: estandarizar un método de cultivo de esferoides de hepatocitos humanos (línea celular HepG2) para la evaluación toxicológica de sustancias y determinar el cambio en la expresión de los genes CYP3A4, CYP2B6 Y CYP1A2 cuando se exponen a diferentes concentraciones de MP2.5. Materiales y métodos: se realizó un cultivo en esferoide de células HepG2 por el método de la gota colgante y posteriormente fueron expuestas a tres concentraciones de MP 2.5 (25, 2.5 y 0.25 μg/ml) por 24 horas. Consecuentemente, se realizó la extracción de ARN y transcipción reversa, y una vez obtenido el cDNA se realizó una PCR cuantitativa en tiempo real. Resultados: se estandarizó un método para la obtención de esferoides, usando una concentración de células de 20.000 células/ml en gotas de 10μl. No se presentó una expresión significativa de los genes CYP3A4, CYP2B6 Y CYP1A2 expuestos a las tres concentraciones del material particulado. Conclusiones: la estandarización del método de la gota colgante, es una gran alternativa para la evaluación de compuestos que generen genotoxicidad. Se recomienda el empleo de microplacas de ultrabaja adherencia para evitar cambios morfológicos de los esferoides, y realizar ensayos de viabilidad celular antes de proceder con la extracción del RNA.